Флуоресцент фильтр флуоресцент микроскопта мөһим компонент. Типик системаның өч төп фильтры бар: дулкынландыргыч фильтр, эмиссия фильтры һәм дихрой көзге. Алар гадәттә кубка төрелгән, группа микроскопка кертелсен өчен.
Флуоресцент фильтр ничек эшли?
Дулкынландыргыч фильтр
Дулкынландыргыч фильтрлар билгеле дулкын озынлыгы яктылыгын тараталар һәм башка дулкын озынлыкларын блоклыйлар. Алар төрле төсләр чыгару өчен фильтрны көйләп, бер төсне генә кулланырга мөмкин. Дулкынландыргыч фильтрлар ике төп төрдә - озын пассажир фильтрлары һәм тасма аша фильтрлар. Экскитер, гадәттә, флюорфор үзләштергән дулкын озынлыкларын гына уза торган полосалар фильтры, шулай итеп флуоресцент чыганакларның дулкынлануын киметә һәм флуоресцент эмиссия полосасында дулкынлану нурын блоклый. Рәсемдә зәңгәр сызык күрсәткәнчә, BP 460-495, димәк, ул 460-495nm флюоресенция аша гына уза ала.
Ул флуоресцент микроскопның яктырту юлына урнаштырылган һәм флюорфор дулкынлану диапазоныннан кала, яктылык чыганагының барлык дулкын озынлыкларын фильтрлый. Фильтр минималь тапшыру образларның яктылыгын һәм яктылыгын күрсәтә. Теләсә нинди дулкынландыргыч фильтр өчен минимум 40% тапшыру тәкъдим ителә, тапшыру идеаль> 85%. Дулкынландыргыч фильтрның киңлеге тулысынча флорофор дулкынлану диапазонында булырга тиеш, фильтрның үзәк дулкын озынлыгы (CWL) флорофорның иң югары дулкын озынлыгына мөмкин кадәр якын. Дулкынландыргыч фильтр оптик тыгызлык (ОД) фонның караңгылыгын күрсәтә; ОД - фильтр дулкын озынлыкларын тапшыру диапазоныннан яки киңлек киңлегеннән ничек блоклый. Минималь OD 3.0 тәкъдим ителә, ләкин 6.0 яки аннан да зуррак OD идеаль.
Чыгарылыш фильтры
Чыгарылыш фильтрлары үрнәктән кирәкле флюоресенцияне детекторга җиткерү максатыннан хезмәт итә. Алар кыска дулкын озынлыкларын блоклыйлар һәм озын дулкын озынлыклары өчен югары тапшыруларга ия. Фильтр тибы шулай ук сан белән бәйләнгән, мәсәлән, BA510IF фигурада (комачаулык барьер фильтры), бу максималь тапшыруның 50% дулкын озынлыгын күрсәтә.
Дулкынландыргыч фильтрлар өчен шул ук тәкъдимнәр эмиссия фильтрлары өчен дә дөрес: минималь тапшыру, киңлек киңлеге, OD һәм CWL. Идеаль CWL, минималь тапшыру һәм OD комбинациясе булган эмиссия фильтры иң мөмкин булган иң якты рәсемнәрне тәэмин итә, иң тирән блоклау белән, һәм иң зәгыйфь эмиссия сигналларын табуны тәэмин итә.
Дихрой көзге
Дихрой көзге 45 ° почмакта дулкынландыргыч фильтр һәм эмиссия фильтры арасында урнаштырылган һәм эмиссия сигналын детекторга җибәргәндә фторофорга таба дулкынлану сигналын чагылдыра. Идеаль дихрой фильтрлар һәм нур бүлүчеләре максималь чагылдыру һәм максималь тапшыру арасында кискен күчүгә ия, дулкынландыргыч фильтрның киңлеге өчен 95% чагылдыру һәм эмиссия фильтрының киңлеге өчен 90% тапшыру. Флюорфорның кисешкән дулкын озынлыгы (λ) белән фильтрны сайлагыз, адашкан яктылыкны киметү һәм флюоресцент сурәтнең сигнал-шу коэффициентын максимумлаштыру.
Бу рәсемдәге дихрой көзге - DM505, шулай дип атала, чөнки 505 нанометр - бу көзге өчен максималь тапшыруның 50% тәшкил иткән дулкын озынлыгы. Бу көзге өчен тапшыру сызыгы 505 нм өстендә югары тапшыруны күрсәтә, 505 нанометрның сул ягына турыдан-туры төшү, һәм сул якта максималь чагылдыру 505 нанометр, ләкин әле 505 нмнан түбәнрәк тапшыру булырга мөмкин.
Озын пасс белән тасма аша фильтрлар арасында нинди аерма бар?
Флуоресцент фильтрларны ике төргә бүлеп була: озын пассажир (LP) һәм тасма пассасы (BP).
Озын пассажир фильтрлар озын дулкын озынлыкларын тараталар һәм кыскаракларын блоклыйлар. Киселгән дулкын озынлыгы - иң югары тапшыруның 50% тәшкил итә, һәм барлык дулкын озынлыклары озын фильтрлар аша бирелә. Алар еш дихрой көзгеләрдә һәм эмиссия фильтрларында кулланыла. Озын пассажир фильтрлар куллану максималь эмиссия җыюны таләп иткәндә һәм спектраль дискриминация кирәк булмаганда яки кирәк булмаганда кулланылырга тиеш, бу гадәттә чагыштырмача түбән дәрәҗәдәге автофлуоресцентлы үрнәкләрдә бер чыгаручы төрне барлыкка китерә торган тикшерүләр өчен.
Тапшыру фильтрлары билгеле бер дулкын озынлыгын гына тараталар, башкаларны блоклыйлар. Алар флорофор эмиссия спектрының иң көчле өлешен генә җибәрергә рөхсәт итеп кросстокны киметәләр, автофлуоресцент тавышны киметәләр һәм шулай итеп озын фильтрлар тәкъдим итә алмаган югары фон автофлуоресцент үрнәкләрендә сигнал-шу коэффициентын яхшырталар.
BestScope ничә флуоресцент фильтр комплекты бирә ала?
Кайбер киң таралган фильтрларга зәңгәр, яшел һәм ультрафиолет фильтрлары керә. Таблицада күрсәтелгәнчә.
| Фильтр җыелмасы | Дулкынландыргыч фильтр | Дихрой көзге | Барьер фильтры | Светофор лампасы Дулкын озынлыгы | Заявка |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485нм | · FITC: Флюоресцент антитела ысулы Кислота кызгылт сары: ДНК, РНК · Аурамин: Туберкул бакилласы · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535нм | · Родамин, TRITC: Флуоресцент антитела ысулы · Пропидий йоды: ДНК · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365нм | · Авто-флуоресцент күзәтү · DAPI: ДНК буяу · Hoechest 332528, 33342: Хромосома буяу өчен кулланыла |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405нм | · Катехоламиннар · 5-гидрокси триптамин · Тетрациклин: Скелет, тешләр |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640нм | · Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Флуоресцент сатып алуда кулланылган фильтр комплектлары флюоресенция кушымталарында кулланылган төп дулкын озынлыгы тирәсендә эшләнгән, ул иң күп кулланылган флюорфорларга нигезләнгән. Шуңа күрә, алар шулай ук DAPI (зәңгәр), FITC (яшел) яки TRITC (кызыл) фильтр кублары кебек сурәтләү өчен ясалган фторофор исеме белән аталган.
| Фильтр җыелмасы | Дулкынландыргыч фильтр | Дихрой көзге | Барьер фильтры | Светофор лампасы Дулкын озынлыгы |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485нм |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365нм |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535нм |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450нм |
| Техас Ред | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560нм |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560нм |
Флуоресцент фильтрны ничек сайлыйсыз?
1. Бигрәк тә мультипотон дулкынлану һәм гомуми эчке чагылдыру микроскопын куллану өчен, зәгыйфь тавыш шулай ук сурәтләү эффектына зур комачаулык китерәчәк, шуңа күрә сигналга тавыш таләбе зуррак.
2. Фторофорның дулкынлану һәм чыгару спектрын белү. Кара фон белән югары сыйфатлы, югары контрастлы образ тудыручы флуоресцент фильтрлар җыелмасы төзү өчен, дулкынлану һәм чыгару фильтрлары флюорфорның дулкынлану дәрәҗәсенә яки эмиссияләренә туры килгән төбәкләр аша минималь пассажир полосасы белән югары тапшыруга ирешергә тиеш.
3. Флуоресцент фильтрларның ныклыгын карагыз. Бу фильтрлар ультрафиолетка (УВ) яктылык тудыручы көчле яктылык чыганакларына зарарсыз булырга тиеш, алар "бетүгә" китерергә мөмкин, аеруча экзитер фильтры, чөнки ул яктырту чыганагының тулы интенсивлыгына дучар.
Төрле флуоресцент үрнәк рәсемнәр
Ресурслар Интернетта тупланган һәм оештырылган, һәм алар өйрәнү һәм аралашу өчен генә кулланыла. Әгәр дә хокук бозу булса, бетерү өчен безнең белән элемтәгә керегез.
Пост вакыты: дек-09-2022